用于细胞计数,浓度和活力的自动化,高通量解决方案

电池计数领域已经有许多改进,并且已经开发了几种仪器以远离耗时的手动单元格计数。然而,即使使用自动化装置,缺乏用于细胞浓度和存活率测量的产量也可以产生过程瓶颈,特别是在大规模或工业制造中。此外,这种缺乏高吞吐量可以限制实验设计或创造在需要分析大量样品时不可行的资源需求。

在最近的海报《塞拉卡》(Cellaca)中TMMX:一种用于高通量、高速细胞计数、浓度和活力的新型仪器。Nexcelom Bioscience提供了一种提高通量和减少过程瓶颈的解决方案。在海报中,作者讨论了Cellaca MX的发展,一个高通量的自动细胞计数系统。该系统使用亮场台番蓝在48秒内即可成像、分析和报告24个样本的细胞浓度和活力,使用多个荧光成像通道可在2.5分钟内完成。它是紧凑的,占地面积小,适合实验室工作台,自动化准备与API兼容的仪器。

在海报中,作者介绍了在Cellaca MX仪器上获得的计数与使用金标准血细胞计量法获得的计数之间的比较结果。他们还使用用锥虫蓝染色的CHO细胞测试该系统,并在Jurkat细胞上进行AOPI细胞活力测定。

来自海报的亮点包括:

高通量

没有瓶颈的平稳过程的最大挑战之一是吞吐量。有限的吞吐量也可以影响实验设计,因为一些研究将需要分析更多的样品,而不是使用手动或半自动方法运行。通过Cellaca MX,通过同时加载和分析24个样品的加载和分析来增加产量,并使用混合井在同一板内执行样品制备的能力(图1)。例如,可以在30分钟内分析480个样品。

灵活性

Cellaca MX在手动模式下操作,也可以作为全自动,基于板的系统。这允许基于项目的最大灵活性和要运行的样本数量。该系统还可以使用明场或荧光成像来计算浓度。可使用台盼蓝排除或荧光活力染料测量可生存能力。

低板块变异性

在海报中,作者通过分析近2000个平均CV <6%的样本,证明了台虫蓝染色CHO-S的一致计数。在本研究中,CHO-S细胞连续培养数周,细胞浓度标准为2×10左右6.细胞/毫升。每次实验将50 μL台虫蓝(终浓度为0.1%)染色的CHO-S细胞装入Cellaca耗材,使用Cellaxa MX细胞计数器进行成像和分析。多个用户能够得出台虫蓝染色CHO-S细胞在平板到平板之间的平均变异小于6%的CV(图2)。在70分钟内共计数和分析了1992个单独加载的样本(83个平板)。

具有一致结果的低样本量要求

样本分析中的另一个常见挑战是样本量要求。通常,仅存在非常小的样品体积,并且对下游测定需要一部分样品体积。通过Cellaca MX,需要仅需要25μl细胞样品。作者证明,负载50和200μL之间几乎没有差异(1.5%)(图3)。对于研究,台盼蓝(TB)染色CHO-S细胞在〜4.5×106.将细胞/ ml在每间孔中以50或200μl加载到24孔板中,成像,并在Cellaca MX自动细胞计数器上分析,每体积条件共进行18个平板(432孔)。

使用AOPI的一致的活力测量

为了展示使用AOPI的一致的活力测量,Jurkat和Cho-S细胞的三天旧培养标准化为约2×106.然后用吖啶橙和碘化丙啶(AOPI)染色细胞/ mL,并在Cellaca MX细胞计数器上分析。即使在低可行性(55%)时,Cellaca MX也产生了一致的活力结果。为每个通道获取明亮场和荧光图像,并自动保存(图4)。在荧光通道中进行蜂窝计数和分析,而捕获明亮场图像以进行文档。

自动计算并报告每口井的生存力。24个样品在第1板的平均存活率为56%,而第2板的平均存活率为53%(图5)。

两个组合板之间的标准测量偏差为4%。

金标准血细胞计与Cellaca MX的高度相关

作者进行了广泛的比较研究,探讨了金标标准血细胞计量和Cellaca MX之间的准确性和一致性。数据显示,Cellaca MX和血细胞计数计数的计数密切相关(多个样品的1.2%,2.3%和0.7%)(图6)。

为了进行研究,将3管5微米的聚苯乙烯珠稀释到~ 2×10的浓度6.珠/ ml。为了确定每个管内的浓度,对每个管进行40个单独的血细胞体计数。然后使用Cellaca MX测量同一组管上的浓度。

总之

随着行业越来越多地转向需要高通量的流程,需要仪器来满足这些需求。本海报的实验展示了一种新的计数和分析多个样本高通量的方法。

要了解有关该研究的更多信息,请查看全尺寸的海报

要了解有关该技术的更多信息,请访问Cellaca MX.

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