快速高滴度蛋白表达的最佳实践

重组蛋白表达对于研究,生物治疗药物发现和结构研究至关重要。选择正确的蛋白表达系统是关键,应仔细考虑每个申请的具体要求。例如,在选择表达方法时,例如蛋白质溶解度,功能,材料的时间和所需的时间通常是重要的考虑因素。

虽然个人应用需求很重要,但是存在普遍性的目标,这是大多数瞬时蛋白质表达活动 - 尽可能快地的产量。诸如Expi蛋白表达系统的Gibco™系列的表达系统,旨在确切地说。EXPI系统提供细胞,培养基,转染试剂和阳性对照,所有优化以共同努力,使最高蛋白质产生迅速。它们可在哺乳动物(HEK293,CHO)和昆虫(SF9)格式中提供。

Gibco™Expicho™
表达系统
Gibco™Expi293™
表达系统
Gibco™Expisf™
表达系统

Gibco Expicho表达系统 Gibco™Expi293™表达系统 Gibco Expisf表达系统
主机类型:哺乳动物
细胞系:高收益率
excicho-s细胞
第7-14天
蛋白质产量:高达3克/升
主机类型:哺乳动物
细胞系:高收益率
Expi293F细胞
第5-7天
蛋白质产量:高达1克/升
宿主类型:昆虫
细胞系:高收益率
Expisf9细胞
第6-10天
蛋白质产量:高达900 mg / L.

在努力分享最佳实践以最大限度地提高瞬态和稳定系统中的蛋白质表达,我们与Rich Altman和Matt McKenna讨论,现场应用科学家支持Thermo Fisher Scientific的Expi蛋白表达系统,关于最大化蛋白质表达和在Expi中实现高滴度表达系统。

最大化蛋白质表达的最佳实践

在实验开始之前了解你的系统

富人和哑光解释说,在开始转染之前,完全理解方案以及您的细胞及其特征是非常重要的。他们建议花时间仔细阅读协议,以降低表达工作流程的可变性。

检查您的孵化器

在开始工作之前,同意确保您的培养箱温度,CO很重要2和湿度都在规范内。他们建议定期定期校准协议到位,而不是仅依靠外部显示器。另一个经常被忽视在繁忙的实验室中的基本尖端正在定期清洁培养箱并将抗微生物添加到水平板上。也使用无菌H.2o填充水库是优选的。

检查您的速度和文化船只

设备和船只是另一个需要检查的组件。检查以确保摇动平台的速度符合您计划使用的文化体积和烧瓶大小。对于烧瓶尺寸,他们建议维持〜1:3.6的培养体积到烧瓶大小。如果培养体积太高或太低,它可以危及细胞培养物。为了摇动速度,在增加培养体积并在增加体积时降低速度,增加速度是重要的。

检查你的细胞

密切监测细胞是成功蛋白质表达的重要前提。它们建议记录细胞密度,倍增时间,生存能力,通道数,并注意到任何偏差。为确保准确性,请在不同稀释液处执行多个单元格计数。在经常转染和解冻新细胞之前,请务必提供新鲜培养基。

自行检查

另一个可以被忽视的区域,但对成功至关重要是创造无菌的工作环境。这些实验室最佳实践可以通过无意中的污染使您的进程保持逐渐变为污染。关键提示包括使一种实验室涂层用于细胞培养,在细胞培养后进行任何细菌工作,经常更换手套,并使用70%乙醇进行清洁用品。最后确保生物安全柜没有杂乱和任何气流阻塞。

保持正确的蛋白质生产比率

烧瓶大小,表达体积,摇速和轨道直径是最佳蛋白质表达和可扩展性的所有关键因素。富含和哑光重新重申将适当的缓冲体积保持为烧瓶比率的重要性。振动速度也必须与培养体积和烧瓶大小相匹配,以确保细胞健康。

对于Expi Systems,他们建议使用Nalgene通风,非挡板烧瓶以获得最佳效果。这些都是遵循以下供应商建议的重要性的良好示例。请参阅以下Expi表达式系统建议:

使用基于系统的方法的优点,如Expi蛋白表达系统用于瞬态蛋白表达

因为Gibco Expi表达系统以基于系统的方法携带专门的高密度细胞,介质和转染技术,它们能够实现蛋白质的药物和疫苗的精简开发,因此您可以使您的研究人员成为生命变化的发现快点。

关于专家

Matt McKenna,现场应用科学家,Thermo Fisher Scientific

基于美国马萨诸塞州
在马萨诸塞州出生并筹集,马特已经在大型制药和小型生物技术的剑桥地区工作了最后18岁。虽然主要关注瞬时蛋白质表达,但Matt还在开发表达单克隆抗体的稳定细胞系方面具有丰富的经验。最近在辉瑞公司,Matt帮助在Expi293系统中开发一个自动化平台方法,以瞬时表达每周数百蛋白。

理查德·阿尔曼,MS,现场应用科学家,Thermo Fisher Scientific

位于美国加利福尼亚州
富含30年的蛋白质表达和生产经验。2019年初,他加入了Thermo Fisher Scientific作为田间应用科学家。此前,他在重组蛋白的克隆,表达,纯化和表征的克隆,表达,纯化和表征中,他为几家制药公司(包括Amgen,Alexion,Bayer和Upjohn)工作。这项工作支持小分子的高通量筛选和蛋白质治疗努力。他获得了分子生物学和生物化学系匹兹堡大学医学院的MS学院。

了解有关Gibco Expi蛋白表达系统的更多信息:

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