Chosource™GS敲除细胞系为生物制造挑战提供了灵活的解决方案

生物学制造面孔越来越多的困难来自治疗分子的日益复杂的设计,需要缩短市场的时间,以及降低药物成本的压力。由于其适应性和稳健性,中国仓鼠卵巢(CHO)细胞长期以来一直是行业的主力。然而,仍然需要通过更稳健和灵活的工程细胞系来保持优化这些CHO细胞,以满足不断发展的生物制造挑战,提供更高的产量并促进产品质量属性的控制。

此外,近年来,灌注和过程强化技术的使用出现了复兴,其动机多种多样,从更好地控制产品质量(特别是在不稳定的产品中),到提高给定足迹的产量,或减少时间线和成本。这些不同的生产模式产生了灵活的设备,能够处理不同的分子类型,需要不同的生产流程和生产规模,而不需要实质性的工程调整。

CHOSOURCE GS KO细胞系

实现稳健和灵活的制造平台的第一个要求是能够表达各种治疗产品架构的柔性表达式细胞系(CHO),并且能够用于不同的尺度和过程工作流程,以便提供足够的产品产量和质量所需的时间范围和成本。近年来,细胞系工程努力为治疗生产产生了改进的宿主细胞系,以最大化蛋白质表达和生物制造中的鲁棒性。一个例子是Horizo​​ n Discovery的Chosource™GS敲除细胞系,使用重组腺相关病毒(RAAV)基因编辑技术。消除内源性谷氨酰胺合成酶(GS)基因促进了在细胞系发育期间具有最佳性能的高表达克隆的选择。GS淘汰赛技术是一个完善的行业标准,由适用于制造生物制剂的监管机构认可。

Chosource符合各种传染媒介策略集合,从标准随机整合,单一启动子载体的共转染或仅使用单一的双启动子载体,转座酶介导的整合,这实现了非常高的产品产量实质性流程优化练习。Horizo​​ n可以提供对向量的访问权限,或者为那些没有内部向量技术或具有特定表达需求的客户推荐不同的选项。

为了促进客户的成功,Horizo​​ n为每一步转染到克隆选择的各步骤提供了全面的协议,以喂养批量过度生长文化和冷冻保存。还提供了一种细胞系历史包,以支持监管提交,并通过CHOSource细胞系的研发和制造的完全记录的可追踪史。ChOSource已用于美国,欧洲,中国,加拿大和澳大利亚的临床试验中的多个监管意见书。

Horizon在多种基因编辑平台上拥有丰富的经验,从rAAV到核酸酶基因组编辑技术,如CRISPR,并提供基因编辑服务,包括单基因和多基因敲除、敲入、点突变,以及引入着陆垫用于位点特异性基因整合或其他应用。地平线提供这些修改在其专有的CHOSOURCE细胞线以及由客户提供的细胞线。

一种自由运作的新方法

Horizo​​ n的Chosource Cell系列为客户提供了一个经过验证的平台,可从与不同传染媒介系统的兼容性和兼容不同的流程和媒体来运行具有实质性灵活性和自由度,以与我们的电池一起使用的不同流程和媒体,而无需任何独特的限制。

许可优势包括:

  • 自由选择任何媒体,饲料,向量,或使用任何CRO / CMO以满足客户的细胞系列开发和制造要求。
  • 自由运营,没有任何与使用Chosource平台相关的知识产权或专利风险进行生物治疗生产。
  • 灵活的许可术语,促进基于风险的策划,这是公司业务模式所需的决策,并控制如何使用细胞系列的方式。
  • 未来的成功是由简单的、免版税的授权保护的,以帮助在整个产品生命周期中保持盈利能力。

自2016年推出以来,CHOSOURCE已被全球超过85家公司授权,并提交了10份经确认的临床监管申请(INDs/ cta)。CHOSOURCE已被用于生产多种蛋白治疗架构,从标准单克隆抗体,双特异性和多特异性抗体,fc融合蛋白,以及其他客户产品。

实例探究

我最近浏览了一个关于Gen的网络研讨会系列,它以不同的治疗迹象和应用类型在不同的治疗迹象中使用Chosource。网络研讨会是一个有价值的资源,因为它展示了使用Chosource正在解决的各种挑战。我总结了下面的关键外来,并提供了全面查看网络研讨会的链接

优化生物治疗生产流程的细胞系

由Allyn Spear,PHD,原则研究科学家,Discovery Research,Elanco Animal Health提供

在本次网络研讨会上,Allyn Spear博士分享了Elanco动物健康公司在实施CHOSOURCE GS基因敲除细胞系在动物健康领域建立生物治疗研究项目方面的经验。他分享了关于他们基于哺乳动物的过程的细节,并介绍了他们的生产工作流程。特别地,他分享了他们评估生长条件、转染方法、克隆细胞系发展和生产力评估的过程。

关键数据外带:

  • 选择源细胞系在标准摇瓶中培养18- 20h,培养时间加倍,细胞生长性能良好。
  • 选择与标准谷氨酰胺合成酶/ MSX选择直截了当,允许在14-28天内进行主要周转池。还使用基于嘌呤霉素选择的其他选择系统(将谷氨酰胺添加到介质上),允许池的5-12天周转时间。基于溶剂酶的向量集成与ChOSource一起使用,具有非常好的生产率结果。在各种分子类型 - 单克隆抗体,Fc融合和其他蛋白质上获得1-3克/升1-3克/升的稳定池表达。
  • 单细胞克隆后,在24深井板和125mL摇瓶中评估不同克隆的产量。在为期14天的批量加料生产中,Elanco发现了与之相当的生产率。

斯普尔博士评论说,Chosource系统在研究路径早期生成高生产池和高生产细胞系。斯皮尔博士继续说,在动物健康中工作的好处是您可以进入目标物种,以便在研究中进行PK,免疫原性甚至一些疗效研究。Elanco使用1.6 L Thompson最佳的增长烧瓶,以支持他们对这些研究的材料需求。因此,它们可以在小占地面积中获得高容量。Spear博士通过共享跨越批量运行的滴度性能来关闭不同分子类型(图1)。

图1:滴度测试和缩放图,显示了表达不同分子类型的12个克隆的FED分批结果(G / L);MAB,FC-FUSCIONS和非FC-融合。

你是稳定的还是暂时的?-优化您的生物治疗细胞系工作流程

由Jounce Therapeutics公司的副科学家迈克尔·卡利文(Michael Cullivan)主持

在本次网络研讨会上,Cullivan先生解释了Jounce是如何通过将CHOSOURCE平台整合到公司药物开发工作流程的不同阶段,从而在他们的蛋白质生产小组和细胞系开发小组之间建立桥梁的。他还提供了用于各种生产目的的CHO细胞系的瞬时和稳定转染的数据。

Clulivan先生和药物开发团队开始查看瞬间转染地平线Chosource Cell系列可以在较短的时间框架中有助于为以后的阶段产生材料。以前,蛋白质生产组使用Excicho,细胞系开发团队正在使用Horizo​​ n Chosource。Joubs of o困难治疗目标是(i)达到初级净化后90%以上的单体含量,(ii)需要适当的滴度,(iii)跨多个运行,分子和秤的可重复过程和(iv)来简化电流的过程蛋白质生产组工作流程。该团队实施了一种饲料和增强者策略来改善滴度。

关键的外卖:

  • 瞬态Chosource Cell系列产生高纯度材料,具有比efficho更多的G1F和更少的人5。
  • 与ExpiCHO相比,瞬时CHOSOURCE细胞株的宿主蛋白(HCP)水平更低。ExpiCHO程序需要额外的净化步骤。
  • 与补充谷氨酰胺相比,共转染GS基因提高了滴度和存活率。
  • 对补充增强剂,特别是丙戊酸(VPA)和丁酸钠/丙酸钠进行了更仔细的检查,得出了一种简化的饲料策略:
    • 在转染后3小时添加VPA
    • 消除丁酸钠/丙酸钠
    • 将总补充葡萄糖从5%减少到3%

这种优化的协议在第11天产生了更高的天线和滴度。它也更简单,导致生产运行更长,较高的滴度,从而允许它们满足他们研究的所有目标。

Cullivan先生突然突然转染ChO-GS细胞可以在短时间内生产用于后期阶段研究的材料。对于他们的下一项研究,他们将看他们是否可以生产稳定的游泳池,以提高从蛋白质生产组转移到细胞系发育的效率和速度。

优化生物治疗细胞系,用于连续制造

杰弗里麦格伦,博士,科学总监博士,普通伊斯科生物制剂

在本次网络研讨会中,McGrew博士介绍了Just-Evotec Biologics如何使用CHOSOURCE GS敲除细胞系快速培养高产细胞系。他分享了几个案例研究,证明了细胞系在灌注过程中能够实现细胞密度在每毫升1亿细胞范围内,并具有较高的特异性生产力。这使得Just-Evotec Biologics将其新的强化低成本生产流程引入到新的生产设备工作流程中。

为了在设施达到高生产率,McGrew博士分享了它们从使用小生物反应器实现了高产。他们在这个过程中确定了许多重要步骤。首先,是通过工程分子设计正确的分子,其分子设计组的可制造性性质和产量提高。

其次,他们依靠高效的CHOSOURCE细胞系,结合不同的表达载体和媒体,最主要的是他们自己的载体和媒体平台。

接下来,McGrew博士给出了一些有趣的数据,比较了稳定油藏中瞬态和变型生产的时间轴。通过消除瞬时表达并结合高通量技术,Just-Evotec Biologics能够节省大约7周的时间(图2)。

图2:工作流程图显示以前的过程,以在稳定的池中的变体生产。
该团队利用了不同的制造策略,McGrew博士提出了他们已经测试过的几种方法的数据。

关键数据外带:

  • Chosource细胞系Chosource细胞系A的增强的补料批量处理培养在2L级的重组抗体,在第13天达到〜15g / L的滴度,具有可活细胞密度(VCD)至每毫升至约14百万个细胞,并保持高于的能力90%。
  • 在灌注培养中表达重组抗体的ChOSource细胞系B的连续灌注培养达到3g / L /天的时间9-19天。VCD每mL〜1亿细胞。可生存性在80%以下下降,据信是由于分子,可获得灌注培养物中的细胞系的其他实例,可用。
  • 在灌注培养中表达重组抗体的连续灌注培养ChOSource细胞系C在可生存率达到4克/升/日,并且每毫升约120百万个细胞。
  • Chosource细胞系D从2L到500μl的Chosource细胞系D的成功扩展在增强的喂养分批培养中,表达重组抗体的第11天达到7克/ L,具有优异的2L至500 L.

概括

这三个网络研讨会突出了CHOSOURCE细胞系的巨大灵活性和鲁棒性,它能够:

  • 在生物制药发现开发工作流的不同阶段提供最佳性能
  • 在各种媒体和过程工作流程中表现良好,可靠,以及不同的表达向量和转染方案
  • 在不同制造方法中表现出良好的性能,包括标准喂养批次,加强喂食批次和连续制造(灌注)工艺
  • 具有非常多样化的分子架构,包括标准重组抗体,Fc融合蛋白和其他类型的重组蛋白的非常多样化的性能
  • 提供高度可扩展的过程

有关具体的研究详细信息,请通过下面的链接查看网络研讨会。

https://horizondiscovery.com/en/resources/gated-landing-page/bioproduction-webinar-series

要了解有关Chosource的更多信息,请访问https://horizo​​ndiscovery.com/en/chosource.

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