COOL工具 - STUNNINT定量RNA和脂质纳米粒子尺寸分布的RNA疫苗

用于RNA-LNP疫苗和基因治疗开发和制造的分析游戏更换器

MRNA脂质纳米粒子(LNP)疫苗的研制和制造在记录时间中是一项证明,目前医学中的新兴治疗潜力令人难以置信的潜力。这项技术不仅促进了猛烈的大流行,而且还在其他传染病的疫苗中探索,作为癌症的治疗,多发性硬化,囊性纤维化等。

正如我们朝着缩放和精简RNA-LNP疫苗的生产,重要的是评估如何改善整体过程。RNA-LNP治疗方法是开发和准确的分析是开发和最终释放的关键部分。具有改进空间的两个关键分析技术是脂质纳米颗粒(LNP)的RNA浓度和尺寸分布,其是RNA-LNP疫苗的质量和功效。188jinbaobo

RNA-LNP疫苗的经典分析方法挑战

与大多数新的新兴治疗方法一样,对诊所的概念和速度的证据强调。一旦治疗性达到了成功水平,重点就会转向如何更具成本的成本,更大的规模和更高的质量。这些评估的关键组成部分是分析数据。

对于RNA-LNP疫苗,LNP粒度对于安装有效免疫应答至关重要,因此动态光散射(DLS)已长期被用作关键分析技术。挑战是,许多DLS乐器一次只能测量一个样本,每次读取时间。这种低级别的吞吐量限制了开发的速度,并且不提供完整的图片,因为无法轻易比较多个样本,并且收集足够的描述性统计数据需要太多时间。

RNA浓度也是一个重要的分析度量,并且传统上用于确定RNA-LNP中的RNA浓度的重要分析度量和染料基荧光测定。然而,在该过程中使用的洗涤剂使LNP稳定LNPS可以干扰测定精度和精度。相比之下,UV / VIS吸光度可以很好地用于纯化样品中的RNA定量,但LNP样品具有高浊度,制作浑浊的溶液,防止大多数UV /可见分光光度计获得准确的读数。

stunner - 适用于目的解决方案

经典分析方法的缺点为分析工具留下了未满足的需求,可以轻松地提供具有高吞吐量的大小和集中信息,以跟上具有挑战性的时间表。为了解决这些需求,未经安排的实验室在1月份在STUNNER上推出了新的RNA-LNP申请。STUNNER通过将高通量DLS与智能,短路径长度UV / VI配对来解决智能化DLS,以量化LNP大小和总RNA浓度,即使在多云的RNA-LNP样品中也可以解决经典分析方法的挑战。它是第一个使用仅使用2μl样品的RNA-LNP尺寸,大小分布,尺寸分布,总RNA浓度和浊度的研究人员提供了第一个平台。

数据是一个完美的契合 - 它是如何工作的

RNA浓度

如上所述,LNP是众所周知的混浊,所以它们的UV / VIS吸光度光谱通过紫外线和可见范围的光散射来支配,使得使用大多数UV / Vis光谱仪来确定RNA浓度困难或不可能确定RNA浓度。

相比之下,STUNNIN利用双子毫米路径长度提供精确的测量和广泛的动态范围。需要短路径以允许足够的光通过样品以获得成功的吸光度测量。然后使用Stunner的专有Unmix算法来隔离浊度的冲击,并确定浊度,RNA和其他样品组分的个体贡献在该整体信号中(图1)。STUNNER量化样品中的总RNA浓度,并将浊度和其他组分的贡献报告给整体吸光度谱。

STUNNER将浊度,RNA和其他组分的贡献从RNA-LNP的总UV / VIS吸收光谱分开
图1。STUNNNER将浊度,RNA和其他组分的贡献与RNA-LNPS的总UV / VIS吸收光谱分开,并使用该信息量化来自2μL样品的总RNA浓度。

与总RNA浓度的RiboGreen®测定相比,LNPS的STUNNER的RNA定量方法已经有利地是有利的,用于总RNA浓度(图2A),在稀释剂,无标准的,无表面活性剂和无染料的情况下工作流程。横跨动态范围跨越,稳定仪用高精度量化RNA-LNP浓度。2倍稀释系列的氟脲-RNA-LNP显示出高度的线性度和与预期的RNA浓度与R有关2> 0.99和接近1的斜率(图2b)。

令人震中的RNA浓度与RiboGreen测定的总mRNA浓度紧密
图2。Stunner的RNA浓度与RiboGreen®(A)测定的总mRNA浓度紧密。2倍稀释系列的氟丝-MRNA-LNP显示出高度线性结果下降至1.2μg/ ml(b)。误差栏是+/- 1标准偏差(SD)。

粒子尺寸

粒度是LNP的另一个临界度量。经典方法使用DLS来验证粒度,但大多数仪器需要高样本卷或者是一次能够一次运行一个样本的低吞吐量。这使得筛选大量配方难以耗时。STUNNER通过在不到1小时的时间内执行高达96个样本的DLS测量来解决此问题。结果可以在概述中显示,因此可以通过眼睛快速比较平均大小和尺寸分布(图3)。这些结果也可以导出为Excel进行进一步分析或保存为PDF报告,简化了其他复杂的实验工作流程和数据管理。

STUNNER的DLS在大约1小时内确定96个LNP样品上的大小和尺寸分布。
图3。STUNNER的DLS在大约1小时内确定96个LNP样品上的大小和尺寸分布。

浊度评估

智能仪提供的另一种工具是浊度的测量。STUNNER的UV / VIS评估浊度可用于通知用户对其粒子发生的事情。胶体系统的浊度由悬浮液中的尺寸,有效载荷和颗粒的数量决定,线性地相关地与空和全LNP的预期颗粒浓度相关(图4)。188jinbaobo具有明确定义的标准,可以使用Stunner的浊度测定作为确定LNP悬浮液中颗粒浓度的方法。

灌注率良好地与LNP的预期颗粒浓度相关,但斜率根据LNP的尺寸和组成而变化,包括核酸的存在。
图4。浊度与LNP的预期颗粒浓度好,但斜率根据LNP的尺寸和组成而变化,包括核酸的存在。

附加的功能

为了进一步提高吞吐量,STUNNER是自动化的SBS格式板和全功能API。对于监管环境,STUNNINN可以配备21个CFR部分11工具,UV / VIS性能可以在美国和欧洲药典要求中核实。对于日常使用,可以通过基本面证明STUNNER的UV / VI性能 - 一套认证的色氨酸标准,展示了跨越OD值的令人震惊的准确性,精度和线性。

概括

STUNNER为疫苗和基因治疗开发期间RNA-LNP的日常分析提供了适用于目的解决方案。STUNNER通过提供高吞吐量,低样本量和简单的一步工作流程来解决目前方法的挑战,以提供易于使用的解决方案来加速RNA-LNP开发。

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