获取无忧无虑的AAV滴度和STUNNER的空/完整表征

在这个迷你网络研讨会和随附的文章中,Kevin Lance,PHD,营销经理在未经修正的实验室,股票如何快速有效地获得AAV滴度和空/完全表征,只需少量的样品。

AAV表征需要多种技术

凯文通过讨论AAV表征的复杂性来开始网络研讨会。适当的表征需要答案到几个问题,包括:存在多少蛋白质,存在多少DNA,是完整的东西,它们是正确的尺寸,是否有任何聚集。结果,仅使用一种方法无法完成AAV表征,因此必须组合几种技术以提供完整的图片。此外,使用多种方法和大多数方法所需的样本量需要大的样本卷来完成AAV表征工作。在图1中,您可以看到AAV的各种特征要求。STUNNER的表征解决方案以绿色表示:在一个报告中提供Capsid Titer,空/全比例和聚合信息,在每种样本的一分钟内。

图1:AAV与解决方案的特性要求STUNNER可以以绿色突出显示。

两个常见技术,动态光散射(DLS)和UV / Vis吸光度各自讲述了AAV故事的一部分。DLS能够提供Capsid Titer和汇总信息,但不能提供有关DNA的信息。UV / VI能够量化总蛋白质,DNA和空与全比比率,但不能提供有关衣壳中所含物质的任何粒子信息。

stunner使表征更有效

接下来,Kevin描述了通过使用stunner获得的表征效率的增加。STUNNER在更少的时间内(每种样本1分钟)结合DLS和UV / VI,以提供更完整的表征图片,并且仅需要2μL样品。预备工作也明显减少,无标签,试剂或标准。

令人讨厌的工作如何?

由于Kevin解释,因此kevin解释的斜率超过10的AAV样本的操作不能更简单12.井沉积到输入中。从那里,将液体拉入微流体储存器中。在此步骤中,样品可以在阅读前占用长达两个小时,而不涉及蒸发。在将板装入仪器后,当空时读取电路,这会从塑料中移除任何吸光度问题。然后,泵将小型真空施加,该真空将样品移动到要读取的微蓄电池中。由于电路具有固定的路径长度,因此可以做出非常精确和准确的读取。

两种技术用于阅读每个样品,UV / Vis浓度和DLS的尺寸。也可以读取SLS强度数据。这STUNNER AAV量子应用程序然后将数据拉到一起提供AAV样本的完整图片(图2)。

图2:STUNNER将来自DLS和UV / VI的数据组合到提供更多完整的AAV图片。

然后kevin提供数据以显示STUNNINS如何为您提供完整的图片和可以使用stunner生成的数据(图3)。

图3:使用stunner获得的示例数据。

智慧如何与其他方法进行比较

下一个Kevin与StrideBio协作共享数据。在协作中,针对两种类型的AAV - 单链(SSAAV)和自互补(SCAAV)评估基因组滴度。将使用DDPCR的结果与stunner的结果进行比较。

对于DDPCR,使用具有不同参数的强大实验来精确计算滴度,这也导致存在的大误差条(图4)。令人震撼达到了类似的基因组滴度结果,具有更好的精度,是仅使用一式三份样品的单一实验的结果。对于SSAAV和SCAAV,结果非常有利地比较,然而DDPCR所需的时间明显高于Sunnner。

图4:使用DDPCR与SUNNNER评估两种类型AAV的Capsid Titer。

在另一个比较中,使用Stunner与ELISA方法计算总衣壳滴度。两种方法的结果与高于0.99以上的1和R 2值的斜率相似(图5),ELISA方法所需的时间大得多。虽然这些数据使用ELISA所需的工作时间手中的工作时间,但斯仑纳能够在不到一小时内运行64次测量,并且由于不需要样品准备,工作仅需5-10分钟。

图5:使用ELISA与SUNNNER评估衣壳滴度。

与StrideBIO的另一种合作检查了与高度纯化的样品的分析超速离心(AUC)相比如何定量全衣壳的百分比。综合AC被读取最高的富集百分比的完整样品,用空衣壳的稀释液用于创造目标百分比。结果良好相关,并且高r2值证明了高度线性。然而,AUC所需数量级的命令更多的样本,并且在Sundner上单个运行所需的45秒的处理时间明显更长。

使用stunner通知您的进程

凯文然后讨论了STUNNAN如何用于通知AAV生产过程。从AAV LOT 1开始,STUNNER确定了样本中的大量聚合。STUNNER提供的完整数据读数还确定了不属于衣壳的额外蛋白质和DNA的存在。UV / Vis将仅显示总量,但通过与DLS数据组合,可以测量过量的蛋白质和DNA的量。相反,检查了第二次批次,DLS显示出低聚集。当所有数据组合时,它证实有很少的自由和聚集的蛋白质或DNA。

Kevin继续描述一个评估令人震撼的量化AAV空/全比的实验。他们为AAV9的完整和空AAV股的混合物融为一体,并以不同的比例混合它们。STUNNER结果与基于稀释的预期结果对齐。在提供基本的血清型详细信息之后,令人震撼与任何血清型都很好。

Sundner的另一个优点是Iodixanol量化。当使用Iodixanol时,重要的是要识别样本中的数量并在每个缓冲交机交换后检查量化。STUNNNER能够检测碘血管低至0.0005%的体积。

概括

总之,STunner能够在仅一个运行中使用UV / VI,DLS和SLS技术进行编译,以提供一种高效和准确的AAV表征方法。STUNNNER提供了AAV的完整故事,并使用仅2μL样品体积的样本聚集,AAV全部和空胶囊滴度和空/全比例提供完整的AAV。

有关更多信息,请点击下方查看完整的现场演示并了解有关STUNNAR的更多信息。

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关于演示者

Kevin Lance是营销经理,涵盖在未经修正实验室的全球分析仪器组合。在未经染色的实验室之前,他的研究经验涵盖了持续抗体输送和纳米技术的领域。他赢得了他的博士学位。从联合UC Berkeley - UCSF生物工程研究生计划中的生物工程。

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