符合Car-T临床研究批准的快速QPCR支原体测试

与其他生物学一样,大多数细胞治疗产品需要微生物检测,包括支原体,无菌和内毒素分析作为最终产品释放标准的一部分。然而,细胞疗法产品具有独特的QC产品释放要求,这需要新的微生物检测技术来支持这些独特的需求。其中一个是,由于细胞是最终产品,因此不能通过最终无菌过滤步骤或经历苛刻的灭菌步骤并具有有限的保质期。因此,实现符合严格的监管要求的流程和最终产品释放的快速微生物检测至关重要,并且还满足细胞疗法产品的独特QC需求。传统的支原体测试方法,无菌和内毒素可能需要几周到一个月,需要大量的样品体积,这不适合细胞疗​​法的有限样品可用性和快速周转时间的需求。这就是为什么快速微生物方法,包括快速PCR支原体方法,为细胞疗法质量管理中的重大挑战提供了重要的解决方案。

快速微生物方法是可以比传统的测试方法更快地检测微生物污染的替代方法,并且在内部更容易实施。从采样到结果的更快的周转时间支持更接近实际最终产品释放和更快的产品释放的最终发布测试,从而提高了产品的安全配置文件和分配速度。另外,许多快速的微生物方法能够通过临床制造提供灵活的吞吐量。快速周转时间,更低的样本量要求和自动化的能力也允许可靠,接近实时的过程中的测试,从而通过设计举措来实现过程分析和质量。快速微生物检测的益处包括:显着更快的结果,产品释放时间降低,所需的样品体积降低,结果更加代表最终治疗产品。从内部携带快速微生物测试实现的额外益处包括:改进的过程控制和节省成本。

然而,存在误解,符合快速微生物方法是挑战的,或者监管机构不愿意接受这种方法。因此,我被鼓励看到Angeliki Grammenos,博士,在4TH.波士顿的年度汽车T会议。在谈话中,Angeliki Grammenos博士分享了Celyad的鉴定快速支原体测试的经验,该测试被多次监管机构批准了多个临床研究。我们很幸运能够分享演示文稿的视频,“使用Roche MycoTool QPCR测定对于ATMP释放Car-T细胞产品被FDA,Famph和MHRA批准的Car-T细胞产品,”这里以及博士的摘要Angeliki Grammenos’ talk.


Celyad历史

Angeliki Gammenos博士通过描述Celyad的背景和在Chepiology&III阶段(欧盟和美国)的II&III中的广泛的制造经验来讲话。Celyad一直在细胞疗法持续11年,并成为美国和比利时100多名员工的临床制造业专家。他们在临床开发的所有阶段都有临床试验,最近专注于Car-T治疗用于治疗复发的难治性急性髓性白血病(RR AML)和商业化路径。他们正在致力于自体和同种异体的Car-T疗法,并且作为Angeliki Grammenos博士分享,已经能够克服免疫原性问题。他们还在努力使用Car-T治疗方法开发用于实体肿瘤的治疗方法。

CAR-T治疗制造

然后她继续描述Celyad制造业和过程。Celyad已经能够将自体Car-T治疗生产时间减少到8-10天,包括具有实时释放的QA / QC。她说,他们能够通过批判性地看待过程和过程测试的每个步骤来实现这一目标,而不是仅在过程结束时进行测试。她分享了从Dana Farber研究所转移汽车T疗法的数据以及他们如何进一步优化该过程,这导致了细胞产量与学术过程的大量数量增加。她解释了提高细胞产量的能力对于提供多种更高剂量是重要的。Celyad目前的制造成功率为94%,其1,100平方米的设施在Mont-Saint Guibert中有两个隔离制造空间,配备了所有Celyad的预期临床试验和每年1000多名患者。因为他们向美国的多个临床网站提供多种产品,因此他们靠近机场,也成功精简了物流以使这成为可能。

特征和产品释放

由于谈判的目的是专注于快速核酸扩增的资格,一种替代的支原体方法,Angeliki Grammenos博士开始讨论高级治疗药品(ATMP)的释放标准。

无菌,支原体和内毒素需要微生物安全测试。每Pheur 2.6.7和USP <63释放ATMP的支原体测试主要是协调。用培养方法(琼脂和肉汤法)和列出选项的指标细胞法。这些选项的局限性是它们都有一个长的周转时间,测试持续时间高达21 + 7天。Angeliki Grammenos博士指出,患者处于疾病的先进阶段,漫长的等待治疗只是甚至是冷冻保存最终产品的选择。此外,在这两个选项中,无法自动化该过程的可能方法,这意味着它不适用于高吞吐量和商业化。

符合快速支原体测试选项

当多年前开始搜索加速的支原体发布测试选项时,FDA告诉Celyad以搜索供应商并在灵敏度,特异性和再现性方面符合其测试样本中选择的方法。After discussing with regulators and researching, Dr. Angeliki Grammenos said Celyad discovered that not only was it feasible, it didn’t appear that it was going to be that difficult as both the PhEur and FDA “left the door open for qualifying an alternative method.”

根据监管指导,Pheur具有替代速度测试的这些要求

  • 核酸扩增(NAT)
  • 如果需要快速方法,则允许直接放大
  • 富集后扩增(主要是增加灵敏度)
  • 每立法指导验证
  • 可比性研究
    • LOD 10 CFU / ml,以替代培养方法
    • 100 CFU / ml的LOD替代指示剂细胞方法

Roche Custom Biotech - Mycotool

在用快速支原体测试选项识别供应商后,Celyad选择了Roche Custom Biotech的MyCotool。Angeliki Grammenos博士解释说,他们选择了MycoTool,因为它符合他们所有的要求,包括它的事实,即它每Pheur 2.6.7完全验证的特异性,检测限和鲁棒性。

其他优势包括:

  • 快速读出
  • 核酸扩增(NAT)
  • 在LightCycler系统上设置并验证
  • 适合自动化(从DNA提取到PCR) - 长期适用性
  • 适用于细胞基质和非细胞基质(原料释放)

然后,她讨论了实施的关键注意事项。因为他们目前正在外包QPCR测定,所以成本与4孔/样品中的传统常规检测方法相媲美。她随访,说明有这样的时间好处,它使成本投资非常值得。她说,取决于产品体积/浓度,可能需要替代采样策略。提取方法在Magna Pure 24/96系统上验证,这对某些最终用户来说可能很重要。

Angeliki Grammenos博士然后讨论了验证过程。因为每recur 2.6.7的Roche对mycotool的完整验证是从.01 cfu / ml到10 cfu / ml的检测限,这足以验证测试本身。她分享了Pheur 2.6.7的引用,指导说明“使用商业套件完全或部分实施分析程序时,制造商已经支持的验证的各个方面,用户可以省略提供支持文档。”这意味着Celyad不需要涵盖验证套件本身的所有要求,因为罗氏已经这样做了。然而,指导前来说,“然而,这一个必须展示与预期用途相关的套件的表演。”简单地说,Celyad必须展示套件适用于他们的产品,预期用途。这意味着它们必须在10 cfu / ml(LOD,特异性)下显示基质抑制界面性质。

目前,他们确实在超过10亿个细胞中的浓度甚至稀释时浓度略有问题。他们决定在冷冻保存之前对药物进行测试。这种方法有效,达到了正确的敏感性和浓度。他们还认为,这是科学上的科学,因为它是他们测试的实际药物。监管机构批准在药物物质上使用其支原体测试方法。

矩阵抑制干扰测试:

  • 1毫升最后培养上清液(细胞外Myco分数)
  • 10.6.细胞(细胞内Myco分数)

Angeliki Grammenos博士还解释说,他们与监管机构合作,仅根据ph欧元2.6.7欧元测试支原体菌株,这适用于其产物,其不包括禽类或昆虫/植物相关菌株。她分享了用于基质抑制/干扰测试的Celyad标准,从Minerva Biolabs的10cfu / ml处不可逆转地灭活支原体。使用的完整菌株列表和Minerva Biolabs部件号如下图所示。

最终结果表明,药物对支原体释放试验的药物物质对LOD和特异性进行了接受。验证摘要以下:

验证摘要

概括

总之,Angeliki Grammenos博士表示,Mycotool适用于细胞产品(药物物质和/或药物产品)中的支原体的快速和敏感的测试。Celyad为他们的Cyad-01 + Cyad-101 ATMP药品临床研究与美国,比利时和英国当局的临床研究合格。另外,基质干扰测试易于使用灭活和校准的冻干的支原体进行。由于实施Roche CustomBioteCh MycoTool支原体实时PCR套件,Celyad将测试时间从二十八天后降低到3天,以进行最终产品释放,只需要一毫升毫升其药物进行测试。Angeliki Grammenos博士共享成本与传统的培养方法相当,因为他们目前正在外包测试,但由于节省时间,他们最终获得了获得。随着Celyad的未来计划在内部携带MycoTool支原体测试,这将导致进一步减少测试时间与同行日,并显着降低成本。

MycoTool支原体实时PCR和QC样品制备套件仅用于质量控制/制造过程。除非另有说明,否则所有Magna Pure 24和Magna Pure 96套件,耗材和配件均用于体外诊断使用。LightCycler®480系统仅用于生命科学研究。不用于诊断过程。

mycotool,magna pure和lightcycler是罗氏的商标。
其他品牌或产品名称是其各自持有人的商标。

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