我的质粒DNA是不稳定的,您是否有关于我们可以促进稳定的内容的任何建议?

回答

一方面,重要的是,您的目标基因(插入物)和质粒(载体)的序列很好地优化。然而,一些质粒本质上是不稳定的。例如,如果插入件非常大并且/或包含反相串联重复。对于大基因,应选择小载体。然而,如果这已经是这种情况,则可能在低拷贝数(在倒置串联重复的情况下相同),可能需要生产质粒。

另一方面,调整生长条件(例如,在较低温度下生长),选择替代宿主,优化工艺条件,并选择用于加工,配方和存储PDNA的右缓冲器,也可以帮助提高其稳定性。

此外,DNase污染和pH对PDNA稳定性产生了很大的影响。DNase可以降解并消化DNA双链,同时极端pH可以破裂,变性甚至改变PDNA序列。因此,为PDNA选择右缓冲器和解决方案是为了保留产品稳定性很长一段时间的基础。最好的选择是具有EDTA的TRIS缓冲器,因为TRIS缓冲液允许控制pH稳定PDNA,而EDTA螯合物抑制DNase活性。

对于储存,PDNA通常储存在-20°C至-80°C,在其中可以保持稳定,并且它也可以在4°C或室温下稳定,但短时间内。

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