生物制剂的快速支原体测试 - 常见问题解答

细胞和基因疗法准备彻底改变医疗保健,但这些产品的制造对质量和安全保证策略构成了新的挑战。在对细胞培养的普遍存在和实际看不见的细菌污染中尤其如此。这些挑战是2019年Pharmalab QPCR测试的2019 Pharmalab会议讲习班的常见线程,特别是鉴于预期修订欧洲药典第2.6.7章。包括共识要点,使用蜂窝矩阵进行测试的重要性以及将NAT作为快速第一检测线定位的实施策略的潜力,然后通过基于文化的互提方法进行结果验证。

为了调查一些最常见的挑战,并提供常见问题解答的有用答案,我们与专家交谈并强调了会议主持人和观众成员的几个共识点。

常见问题如下。

如何基于基因,细胞和组织的先进治疗药品(ATMP),在支原体测试中产生挑战?

一个挑战是周转时间。对于生物制药的支原体测试是一种关键问题,因为制造延误可能是昂贵的并且限制了急需的药物的可用性。通过细胞和基因疗法,它更为至关重要,因为这些疗法具有较短的架子,并为高医疗需求的患者设计。挑战源于常用的“古典”的竞选方法,即培养为基础,需要数周才能产生结果。对支原体的更快检测和监管机构接受替代测试方法的需求已将核酸扩增技术(NAT)移动到聚光灯中。NAT可以通过聚合酶链式反应(PCR)检测支原体DNA的存在,从数周至小时后斜线。

然而,周转时间只是冰山一角。其他因素在实施基于NAT的方法方面也是至关重要的,以确保产品安全。“一项重大挑战”,指出了Paul-Ehrlich-Institut Karo的Jan-Oliver Karo,“ATMPS是广泛多样化的,例如,在起始材料和最终生物基质的起源方面。”随着进一步的创新扩大了ATMP的方法和应用的频谱,这种多样性也会随着时间的推移而增加。

制造过程中的哪个阶段是适当的测试点?

经验表明,并非生物制药或ATMP中的所有时间点都足以用于支原体测试。应根据支原体污染风险最高的点选择测试点。对于ATMP,除了预处理的释放测试的收获外,应评估过程中的测试点,例如在几次通道之后测试源材料或初始蜂窝起始材料。

哪种样品类型最适合测试?

培养上清液或其他无细胞基质可能不足以测试,因为支原体通常附着于甚至侵入细胞。显然,样本选择是验证测试策略的关键参数。另外,在测试之前的样品制备步骤需要仔细考虑测试,以确保用于测试的样品类型仍然代表该产品。因此,建议避免或彻底证明无细胞矩阵,“karo表示。事实上,大多数商业测试开发人员正在向蜂窝矩阵迈向,并观察克服由高细胞计数引起的技术障碍的方法。

您如何构建符合法规要求的简化验证设计?

从验证角度来看,正如Christiana Schnitzler在她的演示中致电的那样,它必须使用复杂的样本或“最坏情况”。她正在通过罗氏定制的MycoTool的MycoTool Mycoplasma实时PCR套件的透明验证领导Boehringer Ingelheim的团队。该试剂盒设计用于与本机样品一起使用,并且施蒂拉特在检测到PCR抑制剂的稳健性,以及DNA提取变化和试剂和样品处理。最终,她的目标是证明测定的敏感性至少与“经典”的竞选方法相提并论。该团队仍在收集对检测限的数据,但初步结果表明,对于十个测试的支原体物种,可以实现对敏感性(≤10CFU/ mL)的调节要求。

斯科尼茨勒的实施方法将测定验证与可比性研究耦合,以确定PCR方法是否与“古典”的培养和指标细胞培养方法一样敏感,具体和鲁棒。此时,初始NAT的方法只有在可以对此等效变换时替代更加费力,采样密集的和冗长的金标准方法。然而,在必要时,强大的实施策略将是使用NAT作为基于第一线的检测和文化的互联方法,如有必要。对于一个,Roche Pharma已经在其制造地板上使用其MycoTool支原体实时PCR溶液,并利用基于文化的方法进行验证。“到目前为止,我们的经验一直是通过监管机构欢迎这种战略,并成功提交意见,”罗氏制药宣布亚历山大巴特。快速且全面的测试策略的右包装也可以利用现有设施。例如,Schnitzler选择了另一种方法来验证NAT结果。“我们在幸运的情况下,”她描述了“,隔壁的测序实验室。我们通过测序确认了所有物种识别。“

您如何将基于NAT的方法实施到过程工作流程中?

基于NAT的商业支原体测试提供了具有广泛物种覆盖率和高灵敏度的优化测定架构的便利性,以及高通量测试和自动化的选择。

一些演示者分享了对市场测试的评估和经验教训,可以使基于NAT的方法更容易。例如,来自卢布尔雅纳大学医学院微生物学和免疫学研究所的Andrej Steyer强调了对CFU比率低基因组拷贝的良好验证标准的需要(GC:CFU)。

Steyer比较了SYBR绿色支原体试验和基于探针的MycoTool支原体实时PCR套件。选择专注于基于探针的套件,因为它表现出稍微更好的敏感性和CT值的可变性,Steyer在两种不同的循环仪上进行了性能并进行了自动DNA提取。GC的差异为10倍:CFU比率在所得PCR和测序数据中重新出现的研究中使用的两种支原体参考标准。Steyer建议“牢记支原体的质量参考标准以及这些可能拥有的影响。”

可以将其集成到现有自动化实验室设置中的适应性的商业解决方案的鲁棒性是另一个演示者的重点。Christie English来自Mycoplasma体验有限公司。描述的输入体积调整她的团队使自动DNA提取在Roche Magna纯粹的紧凑型仪器上的MycoTool支原体实时PCR套件(在较大的Magna纯96上开发了套件)。适应性成功,与实验室中已经使用的支原体测试解决方案的比较显示了两种解决方案的互补益处。“事实上,我们现在正在使用两个套件,”英语结束。

预期的欧洲药典修订将对欧洲药典修订有什么影响.7.7对使用基于NAT的支原体测试进行了影响?

实现基于NAT的支原体测试方法需要全面的验证和演示,表现至少相当于“古典”的竞选方法。在研讨会上讨论的主题强调了需要更详细的验证和实施基于NAT的方法的指导。但是,必须确保具体建议不会分散从创建对未来产品相关的准则的注意力。

点的案例是关于用于验证基于NAT的方法的测试生物所需的支原体参考菌株以及常规测试中的阳性对照。基于PCR基的支原体测试的物种覆盖率非常全面。例如,MycoTool支原体实时PCR套件理论上具有大约150个培养和不可培养的菌株的覆盖率。可以利用这种广泛的覆盖范围进行通用验证。其中,教授博士在维也纳兽医大学兽医学院瑞士科博士和Mycosafe咨询总监推荐扩大基于NAT的方法所需的支原体物种列表,因此选择取决于产品相关性基于基于风险评估确定的潜在条目后的生长能力。卡罗同意了建议,并强调了相应的讨论是在指南修订的范围内。在这种情况下,他指出,验证策略必须捕获可能污染产品的细胞的特异性基因克拉斯玛。“我们赞同使用经过验证的NAT,”卡罗说。“但是,除了通用验证之外,我们还强调需要对产品的彻底风险评估支持的产品特定验证。”

有关快速支原体测试的更多信息,请参阅完整的会议覆盖范围第二国际支原体QPCR测试用户日

MycoTool支原体实时PCR和QC样品制备套件仅用于质量控制/制造过程。
除非另有说明,否则所有Magna Pure 24和Magna Pure 96套件,耗材和配件均用于体外诊断使用。
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