球形培养进程 - 微孔板

在许多研究领域已经证明了3D球体的成功,包括抗癌,药物筛查和体外肿瘤研究。随着使用的增加,已经需要更好的工具,使这些球形的培养物具有均匀的尺寸和大量。这些方法也必须是可重复和有效的。

为了满足这一需求,康宁公司推出了Elplasia钢板系列。这些板可以在标准板上实现高密度、无支架、自组装球体形成、培养和分析。球状体可以培养21天。该板采用具有两种几何类型和两种表面涂层的微腔技术。

虽然3D球状体的好处是明确的,但培养它们可能是挑战性的,并且可以引起对故障排除和问题的需求。对于本周要求专家会议,我们很乐意拥有希拉尔·谢尔曼,高级科学家和奥黛丽贝尔顿,应用科学家们都与康宁生命科学一起回答有关培养球状体的问题和最新进步,包括新的板材选择。


希拉里谢尔曼希拉里谢尔曼他是康宁生命科学应用实验室的高级科学家。希拉里自2005年以来一直在康宁公司工作,并与各种各样的细胞类型,包括哺乳动物,昆虫,初级,干细胞和类器官的广泛应用。她在康宁的主要职责包括创建技术文件,如协议和白皮书,以及为康宁销售团队和客户提供技术支持和培训。希拉里在新罕布什尔大学获得生物学学士学位。在过去的几年里,希拉里专注于3D细胞培养的应用,包括人体器官培养。

Audrey Bergeron.Audrey Bergeron.康宁生命科学公司的应用科学家。她评估新产品,利用康宁细胞培养产品开发方案和技术文件。她为康宁员工和客户提供产品培训。与康宁科学支持团队合作,她还与客户接触,帮助解决他们的研究问题。

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问题1

新的康宁ePlasia板材有哪些涂料?

康宁®ELPLASIA®圆底板可以6,24和96孔格式提供,并具有康宁超低附件(ULA)表面。康宁ULA表面是一种专有的无动物,共价键合水凝胶表面,其是亲水性和中性的。ULA表面促进了依赖依赖性支架游离球体的形成和容易收获。康宁Ellasia圆形底板对于散装球体形成,集合和扩展是最佳的。

康宁Elplasia方形底板是经过等离子体处理的自涂层应用,有6孔、24孔、96孔和384孔格式。正方形底板具有适合图像分析的光学质量表面,使其成为克隆选择和非常小的簇的高倍成像的理想解决方案。

问题2

我们的球状体均致命地造成一致的尺寸。这些板材可以帮助或还有其他解决方案吗?

是的,康宁Elplasia板块将支持稳定的球体形成。如果向每口微孔中加入均匀的细胞混合,相同数量的细胞会落入每口微孔中,从而在每口微孔中形成相似大小的球体。你可以了解更多关于康宁ellasia板块或检查使用指南康宁公司的网站。

问题3

康宁Elplasia钢板是否与染色和成像系统兼容?

是的。康宁Elplasia平板具有清晰的底部和低背景的自体荧光。我们成功地用Elplasia钢板用一个20倍物镜和一个共焦成像仪进行成像。康宁Elplasia也与染色方案兼容。但是,在向孔中加入试剂时要小心,以免干扰到球体。我们也建议避免移液在井底附近。

问题4

我无法使用低粘附孔板得到MCf7球体的形成。你有什么建议吗?我曾成功地将这些用于其他细胞系,但从未用于MCF7。

有些贴壁细胞系不能像其他细胞系那样形成球形。康宁的科学应用团队注意到,当单独使用超低黏附方法时,MCF7细胞形成松散的聚集体。我们能够帮助这样的细胞成功形成球状体的一种方法是在甲基纤维素的存在下培育细胞或在细胞上覆盖一层Corning®Matrigel®Matrix.播种后的第一天在一个圆底超低附着容器中。

问题5

从球状培养物中除去单个细胞的最佳方法是什么?

从球状体解离细胞,我们建议用解离试剂孵育球状体,例如quoutase.,5 mm EDTA,1X胰蛋白酶/ EDTA,或1x,5倍或10x Tryple。解离细胞所需的孵育时间取决于细胞类型,球状尺寸和培养时间的长度。一旦球状体开始解离,移液管混合几次,这将产生单一的细胞悬浮液。

问题6

您如何建议在86型圆形底部康宁®球形微孔板中执行介质变化,而不会移除球状体?

有几种不同的方法可以用来改变媒体康宁®球形微孔板。多通道移液管可用于执行半介质变化而不会扰乱球状体。我们建议将移液管尖端放入每个孔的一侧,同时吸入和分配。去除介质的另一种选择是使用可容易剥离的可容纳的多针吸气器,挂钩为真空如a不锈钢歧管,可以从Drummond,VWR或Fisher Scientific购买。垫圈或管道可以放置在吸气销工具的任一端,以设定销的高度,这将限制它们进入球状微孔板的速度。我们建议至少留下至少20毫升/良好的培养基,以免打扰球状体。最终选择是使用自动化。例如,Biotek.有一个AMX模块Multiflow FX多模分配器这是专门为改变介质的球体设计的。

问题7

我们的实验室正在使用甲基纤维素准备球状体的问题,你有更好的解决方案吗?

有几种不同的球体形成方法,可根据您的细胞类型和应用使用。如果您有兴趣形成许多不同尺寸的球形,则平底超低附着涂层烧瓶或者一个旋转瓶可以使用。如果你想分析同样大小的单个球体,我们推荐康宁公司96- ,384-, 或者1536.-嗯球体微型板块。如果你需要生产很多相同尺寸的球体,我们建议康宁Elplasia24-well或者6井多孔板。康宁Ellasia微孔板也可用于产生每孔的多个球状体,以便增加测定响应信号或细胞数,如果这是您的测定所需的要求。

问题8

你推荐使用冷冻或石蜡切片进行球形染色吗?

Cryo和石蜡方法都已成功用于球形染色。康宁生命科学申请团队有一个可用于石蜡嵌入的议定书。下载应用笔记,“球状加工和组织学的嵌入“。

问题9

在移动时,我们遇到了粘附到移管的球体难以解决。你有什么建议吗?

一种建议是使用专门设计用来防止粘连的吸管头,比如Axygen MaxymumRecovery®提示。另一个建议是用含有蛋白质的培养基预浸湿移液管或移液管尖端。

问题10.

如果您只有一组细胞一起集中在一起或实际的球体,那么识别的最佳方法是什么?你能讲多少速度来讲述?

一般来说,你可以用相位对比或明场显微镜来区分。如果你有一个球体,你不应该看到单个细胞的边缘,就像你看到一组细胞聚集在一起一样。这个时间是由细胞类型决定的。例如,HT29细胞通常在1-2天内形成球状,但原发的人类肝细胞形成球状需要7天。

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